نوآوری در استخراج DNA از نمونه پاپ اسمیر

زگیل تناسلی، عارضه ای پوستی/مخاطی است که به واسطه عفونت با ویروس Human Papillomavirus ایجاد میشود. این ویروس از خانواده Papillomaviridae با ژنوم DNA دو رشته ای حلقوی می‌باشد

انتقال ویروس HPV

این ویروس از طریق تماس مستقیم لایه مخاطی یا پوست آلوده فرد مبتلا، به فرد سالم منتقل شده و با اتصال به پروتئوگلیکان هپاران سولفات، به روش اندوسیتوز وارد سلول میزبان میشود

سلول های هدف Human Papilloma

سلول های مخاطی و پوستی هدف این ویروس، از جمله سلول های کراتینوسیت و سلول های بازال پوست و مخاط می‌باشد. سلول پس از ورود به این سلول ها، تکثیر پیدا کرده و موجب ایجاد ضایعات زگیل میشود.

تایپ های ویروس پاپیلومای انسانی

تا به امروز حدود 230 Type این ویروس در جهان شناسایی شده است که از نظر ریسک بیماری به دو دسته Low Risk و High Risk تقسیم بندی می‌شود

High Risk

این تایپها شامل 16، 18، 31، 33، 35، 39، 45، 51، 52، 56، 58، 59، 66، 68 و… میباشد. که ریسک بالایی در ایجاد سرطان بدخیم از جمله سرطان دهانه رحم دارا میباشند. از شایع ترین آنها دو تایپ 16 و 18 به تنهایی 70 درصد آمار مبتلایان را به خود اختصاص داده اند.

Low Risk

تایپ های 6 و 11 از جمله تایپ های کم خطر این ویروس بوده که ریسک ایجاد سرطان پایینی دارند .که موجب ایجاد زگیل های پوستی یا پاپیلومای حنجره میشوند.

نمونه گیری

در ضایعات پوستی، با استفاده از تیغ بیستوری، به آرامی و به صورت لایه لایه از سطح ضایعه، پوست برداشته شده و در ویال استریل نگهداری می‌شود.

اما در نمونه های مخاطی از جمله واژن، با استفاده از براش های مخصوص، لایه مخاطی و بخشی از لایه پوششی برداشته میشود. و این نمونه در ویال پاپ اسمیر گذاشته شده تا برای استخراج DNA نگهداری شود.

تشخیص زگیل تناسلی | ویروس HPV

از آنجایی که این ویروس از نوع DNA ویروس بوده ابتدا با استفاده از کیت استخراج DNA ویروسی، ژنوم استخراج میشود. سپس با استفاه از تکنیک های مختلفی از جمله Real Time PCR ، هیبریداسیون درجا و… وجود ژنوم ویروس و تایپ آن مشخص میشود.

استخراج DNA ویروسی

روش های متعددی در استخراج DNA از نمونه های پوستی و مخاطی وجود دارد که یکی از متداول ترین آنها، روش ستون سیلیکا می‌باشد.این روش که از سرعت عمل بالایی برخوردار است، با استفاده از محلول های لیزکننده و شستشو دهنده بهینه، DNA از سایر اجزای سلولی، توسط فیلتر موجود در ستون سیلیکا، جدا میشود.

یکی از نکات اصلی در تشخیص، تخلیص بالاترین میزان DNA از نمونه میباشد. در نمونه هایی با لود ویروسی پایین، کمیت استخراج تاثیر زیادی بر تشخیص بیماری میگذارد. بدین صورت که در صورت استخراج غلظت پایین DNA، بخش زیادی از ژنوم ویروس از دست رفته و موجب نتایج منفی کاذب میشود.

نوآوری در تلخیص Viral DNA

روش ستون سیلیکا به علت راحتی و سرعت عمل بالا، در آزمایشگاه ها با تعداد نمونه بالا، از ارجحیت بیشتری نسبت به روش های دیگر برخوردار است. اما به علت وابستگی بالای تخلیص به ظرفیت اتصال فیلتر موجود در ستون سیلیکا و قیمت بسیار بالا و دسترسی کم به ستون سیلیکای خارجی، استفاده از ستون های سیلیکای موجود، چالش هایی را در پیش دارد.

استفاده از نانوذره سیلیس در کنار ستون سیلیکا

به منظور جبران ظرفیت محدود ستون های سیلیکای موجود، استفاده از نانوذره پوشش دار سیلیس علاوه بر ستون سیلیکا، ظرفیت تخلیص را بالا میبرد. این نانوذره در مرحله لیزات، به DNA متصل شده و با انتقال به ستون سیلیکا، بخش متصل نشده نیز توسط فیلتر سیلیکا جذب میشود.

به منظوراین همکاری، استفاده از محلول لیز کننده و اتصال دهنده ای که شرایط اتصال همزمان DNA به نانوذره وستون را فراهم کند الزامی است.

کیت استخراج اسید نوکلئیک ویروسی شرکت دانش بنیان راتین ژن

ما در تیم راتین ژن، پس از تحقیق و توسعه فراوان، توانسته ایم کیتی را بهینه سازی و تولید کنیم که امکان تخلیص بالای 95 درصد اسید نوکلئیک موجود در نمونه را داشته و به میزان زیادی از نتیجه منفی کاذب جلوگیری میکند.

جهت مشاهده اطلاعات محصول کلیک کنید.

Viral Nucleic Acid Extraction Kit

دارای مجوز IVD از سازمان غذا و دارو

برند Techngene