نحوه ساخت بافر TAE

بافر TAE که شامل نمک Tris، استیک اسید و EDTA است یکی از بافر های الکتروفورز قطعات DNA و RNA می‌باشد. این بافر جهت ثابت نگه داشتن بار اسید نوکلئیک حین عبور از ژل آگارز و جلوگیری از هیدرولیز و تجزیه آنزیمی آن مورد استفاده قرار میگیرد

TAE با TBE چه تفاوتی دارد

تفاوت این دو بافر در اسید مورد استفاده میباشد به صورتی که در TAE از اسید استیک گلاسیال و در TBE از بوریک اسید استفاده میشود. تفاوت این دو اسید در کاربرد آنها اهمیت پیدا میکند. از آنجا که بوریک اسید قدرت مهارکنندگی بالایی در فعالیت آنزیمی داشته، در پروژه هایی مثل کلونینگ ژن که قطعه DNA هدف از ژل آگارز استخراج شده و تحت فعالیت های برشی و یا اتصال توسط آنزیم Ligase قرار گیرد، در صورت وجود آلودگی بوریک اسید در نمونه، فعالیت آنزیم مهار میشود. بدین منظور در پروژه هایی که باید قطعه الکتروفورز جدا شده و با آنزیم تیمار شودد، از بافر TAE استفاده میشود.

نمک های مورد استفاده در ساخت بافر TAE

• Tris-base
• Acetic Acid اسید استیک گلاسیال
• EDTA اتیلن دی آمین تترا استیک اسید

طرز تهیه بافر

از آنجایی که انحلال پذیری اسید استیک در این بافر بالا بوده، امکان تهیه بافر با غلظت بالای 50X وجود دارد. بدین منظور 2 مولار Tris-Base و 1 مولار اسید استیک( با توجه به دانسیته محلول، مقدار حجمی آن محاسبه میشود.) و 50 میلی مولار EDTA با یکدیگر مخلوط میشود. و همچنین از انجایی که EDTA به کندی در آب حل میشود، ابتدا یک محلول 0.5 مولار از این نمک را در PH 8 در حضور NaOH حل کرده و در نهایت با فرمول C1V1=C2V2 مقداری از آن را به محلول اصلی انتقال دهید که به غلظت نهایی 50 میلی مولار برسد.

به عنوان مثال جهت تهیه 100 سی سی محلول TAE50X :

24.22 گرم تریس باز، 5.72 میلی لیتر اسید استیک و 1.86 گرم EDTA دی سدیم را به حجم 100 سی سی رسانده و با NaOH یا اسید استیک، Ph را در محدوده 8.5 تنظیم میکنیم. اما همانطور که گفته شد، ترجیحا EDTA را از قبل حل کرده سپس متناسب با غلظت مورد نیاز به محلول اضافه کنید.

آیا میشود از Tris HCl به جای Tris Base در ساخت بافر TAE استفاده کرد؟

خیر. به منظور ایجاد بار منفی در DNA جهت حرکت در ژل، Ph محیط باید قلیالی و در حدود 8.5 باشد، حضور تریس باز در کنار استیک اسید این ph را به صورت آمفوتری حدود 8.5 نگه میدارد. در صورت استفاده از Tris-HCl که ph اسیدی دارد، Ph محلول نیز اسیدی شده و بار منفی اسید نوکلئیک خنثی شده و حرکت قطعات DNA در ژل مختل میشود.

محاسبه مقادیر TRIS-Acetate-EDTA

به منظور راحتی ساخت بافر، ما در تیم راتین ژن، محاسبه گری با آماده کرده ایم که با توجه به غلظت و حجم مورد نیاز، مقادیر مواد را برای شما محاسبه میکند. جهت مراجعه به صفحه مورد نظر، کلیک کنید

خرید بافر TAE

شرکت دانش بنیان راتین ژن، این محلول را با استفاده از مواد اولیه مرغوب تهیه کرده و در اختیار شما میگذارد. جهت مشاهده اطلاعات محصول و خرید، کلیک کنید.