آنزیم HyperTherm SynFusion Reverse Transcriptase – نسل جدید RT با پایداری حرارتی بالا

HyperTherm SynFusion Reverse Transcriptase یک آنزیم رونوشت‌بردار معکوس (RT) پیشرفته است که توسط تیم تحقیق و توسعه راتین ژن طراحی و تولید شده است. این آنزیم با پایداری حرارتی بالا تا 65°C و غیر فعال کردن فعالیت RNase H، موجب بهینه شدن Priming و سنتز دقیق و کامل cDNA از انواع RNA را میشود

ویژگی‌های کلیدی HyperTherm SynFusion RT

1. پایداری حرارتی فوق‌العاده

با افزودن دو قطعه پروتئینی در N-terminal و C-terminal و ایجاد جهش‌های نقطه‌ای (Point Mutation)، این آنزیم در دمای 45–65 درجه سانتی‌گراد پایدار می‌ماند. پایداری حرارتی بالا باعث باز شدن ساختارهای ثانویه پیچیده RNA و افزایش کارایی پرایمرها در سنتز cDNA می‌شود.

2. غیر فعال شدن RNase H

با غیرفعال کردن بخش RNase H، RNA به صورت یکپارچه و کامل تا طول 13Kb به cDNA تبدیل می‌شود این ویژگی موجب سنتز دقیق و کامل cDNA و بهبود کیفیت RT-PCR و توالی‌یابی می‌شود.

3. حساسیت و دقت بالا

قابلیت عملکرد حتی با مقادیر بسیار کم RNA (تا 1 پیکوگرم) و تولید cDNA با طول کامل و دقت بالا، از دیگر ویژگی‌های برجسته این آنزیم است.

عملکرد HyperTherm SynFusion RT در مقایسه با آنزیم‌ مرجع

آنزیم RT چیست و کاربردهای آن

ریورس ترنسکریپتاز (Reverse Transcriptase – RT) آنزیمی است که RNA را به DNA مکمل (cDNA) یا DNA حلقوی تبدیل می‌کند. این آنزیم نقش مهمی در تکنیک‌های آزمایشگاهی مانند RT-PCR، توالی‌یابی RNA و تشخیص ویروس‌های RNA دارد.

انواع آنزیم‌های RT و نسخه‌های مهندسی‌شده

• RNase H-minus: فعالیت RNase H غیرفعال شده تا RNA در طول سنتز تجزیه نشود و cDNA بلند و کامل تولید شود.

• Thermo-Resistant RT: با جهش‌های حرارتی، این نسخه قادر است در دماهای بالا فعالیت کند و ساختارهای پیچیده RNA را باز کند، که موجب افزایش دقت و بازده سنتز cDNA می‌شود.

ساختار آنزیم RT

آنزیم RT شامل دو دومین اصلی است:

1. دومین پلیمراز: افزودن نوکلئوتیدهای DNA مطابق الگوی RNA

2. دومین RNase H: حذف رشته RNA در کمپلکس RNA-DNA

مزایای استفاده از HyperTherm SynFusion RT

• سنتز cDNA کامل و یکپارچه از RNA با ساختار ثانویه پیچیده

• عملکرد پایدار در دمای 50–65°C برای افزایش دقت و کاهش خطا

• کاهش Ct و بهبود نتایج RT-qPCR

• مناسب برای پرایمرهای طراحی‌شده در اگزون‌های اولیه RNA

• کیفیت همتراز با آنزیم‌های خارجی، با قیمت مقرون‌به‌صرفه

این آنزیم با اضافه کردن دو توالی به دو سر آنزیم و ایجاد point mutation در نواحی کلیدی، پایداری دمایی آنزیم را بالا برده درنتیجه بررسی بیان ژنهایی که به علت ساختار ثانویه rna در دسترس آنزیم قرار نمیگیرند و موجب عدم شرکت آنها در واکنش شده و درنتیجه موجب افزایش Ct در RT-qPCR می شود را امکان پذیر میسازد( در بسیاری از تست های بررسی بیان ژن، بالا بودن Ct به همین علت میباشد نه پایین بودن بیان ژن مربوطه در سلول هدف!!!)

با پایین آوردن فعالیت و یا غیر فعال کردن بخش RNase H رشته RNA بلند به صورت یکپارچه و کامل به cDNA تبدیل می شود در نتیجه درصورتی که پرایمر های PCR در اگزون های اولیه(نزدیک به سر 5′) طراحی شده باشند و از آنجایی که سنتز از انتهای 3′ (دم poly A) شروع شده و به سر 5′ میرسد، در نتیجه اگزون های اولیه نیز به طور کامل به cDNA رونویسی شده و در نهایت در واکنش PCR شرکت خواهند کرد( در موارد زیادی، بالا بودن Ct در ریل تایم PCR بررسی بیان ژن، عدم امکان طراحی پرایمر در اگزون های نزدیک به سر 3′ بوده در نتیجه به اجبار باید پرایمر را در اگزون های اول طراحی کنیم، حال اگر آنزیم RT به صورت یکپارچه سنتز رو انجام نداده باشه، اگزون های اول به cDNA تبدیل نشده در نتیجه در واکنش PCR شرکت نخواهند کرد در نهایت به اشتباه بیان ژن پایین گزارش میشود!!!)

خرید آنزیم HyperTherm SynFusion Reverse Transcriptase

برای خرید، دریافت بروشور و پشتیبانی تخصصی با شماره‌های تماس موجود در سایت راتین ژن ارتباط برقرار کنید. این محصول مناسب برای تحقیقات ژنتیک، تشخیص ویروس و کاربردهای مولکولی پیشرفته است

دانلود بروشور محصول

قیمت آنزیم RT:

تولید داخل، ضمن دارا بودن کیفیت و کارایی بالا، قیمتی بسیار مقرون به صرفه را در پی دارد.

خرید آنزیم RT:

جهت کسب اطلاعات، خرید و پشتیبانی محصول، با شماره های موجود در سایت با ما در ارتباط باشید.