microRNA cDNA Synthesis Kit (Poly A)-برند Technogene

کیت سنتز cDNA بر اساس Poly Adenylation، جهت بررسی بیان microRNA

با بهره گیری از دو سری واکنش آنزیمی microRNA به cDNA تبدیل می‌شود;در ابتدا با استفاده از اجزای کیت Poly (A) Polymerase، تعداد 30-100 نوکلئوتید آدنین به انتهای 3′ رشته میکرو آر ان ای اضافه شده و در مرحله بعد با اتصال پرایمر آداپتور دارای ناحیه Poly T به دم پلیA و فعالیت آنزیم ترنسریپتاز معکوس complementaryDNA ایجاد می‌شود تا علاوه بر ایجاد رشته الگو، طول قطعه برای واکنش PCR افزایش یابد

اجزای کیت microRNA cDNA Synthesis Kit

•  آنزیم  (250units)Poly (A) Polymerase و
• 10x PAP Buffer
•  (10mM) ATP
• (10000units)HyperTherm SynFusion Revere Transcriptase
• 10x RT Buffer
•  (40mM) dNTP
• DTT

دانلود بروشور محصول

[embedpress_pdf]https://ratingene.com/wp-content/uploads/2025/01/تاییدیه-و-نتایج-کیت-PolyA-Polymerase.pdf[/embedpress_pdf]

مزایای کلیدی

• دو آنزیم در یک کیت: شامل Poly(A) Polymerase و RT مقاوم به حرارت تا 65°C با RNase H غیر فعال.

• دم‌دار کردن RNAهای کوتاه: مناسب microRNA و siRNA برای سنتز cDNA.

• کیفیت cDNA بالا: سنتز کامل و دقیق بدون تجزیه RNA.

• صرفه‌جویی اقتصادی: تولید داخلی آنزیم‌ها با قیمتی کمتر از نصف نمونه‌های خارجی.

• مقیاس‌پذیری بالا: امکان آنالیز همزمان چندین microRNA با یک مرحله سنتز cDNA

تفاوت با روش Stem-loop RT

در روش Stem loop به ازای هر microRNA نیاز به یک پرایمر آداپتور اختصاصی و مرحله سنتز cDNA جداگانه می‌‌باشد اما در روش پلی آدنیلاسیون، در یک مرحله تمامی رشته های small RNA به سی دی ان ای تبدیل شده و امکان بررسی همزمان چندین miRNA میسر می‌شود که موجب صرفه جویی در زمان و هزینه خواهد شد.

شرکت دانش بنیان راتین ژن با رسالت پشتیبانی از جامعه علمی کشور و تسهیل دسترسی پژوهشگران به محصولات تخصصی آزمایشگاهی، برای اولین بار در ایران کیت Poly (A) Polymerase را با تکیه بر دانش و تخصص بومی طراحی و تولید کرده و کیت microRNA cDNA Synthesis  را به طور کامل طراحی، بهینه و بومی سازی کرده است.

سوالات متداول

پس از پلی آدنیلاسیون، نیاز به حذف آنزیم Poly(A) Polymerase است؟

از آنجایی که حضور آنزیم فعال در میکس سنتزcDNA، میتواند پرایمر آداپتور را نیز پلی آدنیله کند و این تغییر موجب اختلال در سنتز شود، شستشو یا غیرفعالسازی توصیه میشود.

حجم نهایی واکنش چند میکرولیتر است؟

20 میکرولیتر، اما امکان کاهش حجم با رعایت نسبت حجم مواد، امکانپذیر است

آیا میتوان مقدار آنزیم کمتری در میکس آنزیمی استفاده کرد؟

بله، از آنجا که مقدار آنزیم موجود در کیت در بیشینه خود وجود دارد، میتوان با توجه به غلظت و مقدار RNA استفاده شده، در ستاپ واکنش ها از میزان آنزیم کمتری استفاده کرد.

چه تفاوتی بین روش Stem Loop با پلی آدنیلاسیون وجود دارد؟

در روش stem loop در مرحله سنتز cDNA، از یک پرایمر که در انتهای 3′ خود، 6 نوکلئوتید اختصاصی هر microRNA است استفاده میشود و برای هر miRNA، نیاز به سنتز اختصاصی دارد. در روش پلی آدنیلاسون، در مرحله سنتز cDNA، از یک پرایمر دارای ناحیه پلیT جهت اتصال یه microRNA های پلی آدنیله شده استفاده میشود و تنها با یک مرحله، تمامی microRNA ها به cDNA تبدیل می‌شوند.

دمای نگهداری کیت چند درجه است؟

آنزیم RT و PAP موجود در کیت باید در دمای -20 نگهداری شوند.

آیا کیت کنترل کیفی شده است؟

بله آنزیم های موجود در کیت و واکنش انجام شده توسط آنها، به صورت هفتگی کنترل میشوند.

با هر سنتزcDNA چند microRNA را میتوان بررسی کرد؟

حجم واکنش سنتز20 میکرولیتر می‌باشد. با توجه به این حجم، به عنوان مثال اگر در مرحله ریل تایم PCR حجم 1 میکرولتر cDNA استفاده شود، تا 20 microRNA متفاوت را میتوان بررسی کرد.

مزیت این کیت نسبت به محصولات مشابه خارجی چیست؟

آنزیم های موجود در کیت مطابق با استاندار بین المللی از جمله ISO13485 تولید شده است و پایداری و فعالیتی برابر با برند های معتبر دارد و در کنار کیفیت، قیمت کیت به علت تولید داخل و حذف واسط ها مقرون به صرفه می‌باشد.